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怎么操作平板划线才标准?

多多猪 三阶会员 用户来自于: 广东省深圳市
2021-10-13 08:45

01操作前准备

将接种环2支,酒精灯2个,打火机2个,无菌平板两包,酒精棉球2瓶,镊子2个,洁净烧杯2个置于超净工作台,打开紫外灯,灭菌30分钟。

取待纯化菌种2支放入超净工作台。操作者直立坐于操作台前,打开操作台玻璃,高度可供双手顺利出入即可。

02擦拭

用镊子取酒精棉球擦拭双手,在超净工作台门口处,并将台面擦出与肩同宽的正方形区域,此区域即为操作区域。将用毕的棉球放入烧杯中。


03物品摆放

将酒精灯放于擦拭区域的中心,将接种环放于酒精灯的右侧,将菌种放于酒精灯的左侧,将无菌平板的包装除去,包装置于操作区外,无菌平板置于酒精灯左侧。


04点燃酒精灯

打开酒精灯盖,将盖扣于离开操作区的台面上,点燃酒精灯,酒精灯周围3-5cm之内即为无菌区。

05灼烧接种环

右手持接种环,将接种环的金属丝直立于酒精灯外焰处,灼烧至红透,然后略倾斜接种环,灼烧金属杆,注意灼烧时要将金属丝与金属杆的连接部分充分灼烧。

06取菌种

左手持斜面的底部,将管口置于火焰的无菌区,右手小指打开试管塞,将接种环的接种丝放于外焰处再次灼烧至红透,然后将其深入试管内部,稍微凉一下,轻轻取一环,勿划破培养基,将接种环从试管中取出,注意取时勿碰触试管壁。将试管塞灼烧一圈,塞于试管上。因试管口一直在火焰的外焰处,故其温度较高,塞试管塞时注意勿烫手。

07接种

左手取无菌平板一个,用拇指和食指控制皿盖,其余几指控制皿底,打开皿盖,使开口角小于30°,将接种环上的菌种按图示进行划线,一区法要求连续划线,且线的边缘应划至培养皿的内缘,线要紧密但不相连。三区或四区法要求每划完一区,都应灼烧接种环,后一区要求与前一区首尾相连,但不得与其他区域搭在一起。具体的划线顺序如下图:
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08培养

将接种完毕的平板放于恒温培养箱中倒置培养。

09整理台面

操作完毕后,将实验所需的物品放回原处,并将实验所产生的垃圾清理干净,带出超净台,放于垃圾桶中。

10结果观察

72小时后,观察平板,应无杂菌污染,若菌种不在划线的线上则为杂菌;线应为直的,且每一线都接近平板边缘,平行的线和线之间要紧密,但不能搭在一起;要有较多的单菌落,至少应有10个以上的单菌落方为合格。