sj314520的主页 - 分享质量人的知识和经验

登录

sj314520 二阶会员

这家伙还没有留下自我介绍

保密

关注: 39 | 粉丝: 36 | 积分: 340 | 威望: 1 | 访问: 2668

sj314520 在 2023-10-17 23:35 回答了问题 药品研发: IND申报时对载体构建有何要求？; sj314520: √1 提供表达载体的名称、来源、结构和遗传特性。如对表达载体进行基因操作，应评估引入辅助基因(如某些转移酶或者病毒基因片段)的表达调控状态、表达产物残留量，以及对制品安全性和有效性的潜在影响等。√2 提供重组表达载体构建、克隆筛选方法和酶切鉴定结果，插入基因和表达载体两侧端控制区的核苷酸序列及测序彩...; 赞同0 反对 0 人感谢 0 评论 1 回复

sj314520 在 2023-10-17 23:35 回答了问题 药品研发: 载体至少应具备哪些条件？; sj314520: √1 具有对受体细胞的可转移性或亲和性，以提高载体导入受体细胞的效率。√2 具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点，使得外源基因在受体细胞中稳定遗传。√3 具有较高的外源DNA的载装能力，以满足长片段的克隆。√4 具有多种单一的核酸内切酶识别切割位点，有利于外源基因的拼接插入。√5 具有合适的...; 赞同0 反对 0 人感谢 0 评论 1 回复

sj314520 在 2023-10-17 23:34 回答了问题 药品研发: 常用的载体有哪些？; sj314520: 质粒载体、噬菌体载体、病毒载体√质粒载体质粒载体是一种相对分子质量较小、独立于染色体DNA之外的环状DNA(一般有1～200 kb左右，kb为千碱基对)，有的一个细菌中有一个，有的一个细菌中有多个。质粒能通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移，可以独立复制，也可整合到细菌染色体DNA中，随着染...; 赞同0 反对 0 人感谢 0 评论 1 回复

sj314520 在 2023-10-17 23:34 回答了问题 药品研发: 瞬转和稳转有什么区别？; sj314520: √瞬转指外源基因导入到细胞后得以表达，但是基因不整合到细胞的基因组上，因此不会随着细胞的生长复制。因此，瞬时转染的时间有限，通常只持续几天，直到外源基因在细胞生长分裂过程中因各种因素消失为止。√稳转瞬时转染的基础上，瞬时转染时有一小部分的基因会整合到细胞基因组上，并随着细胞的生长分裂，质粒会随机...; 赞同0 反对 0 人感谢 0 评论 1 回复

sj314520 在 2023-10-17 23:33 回答了问题 药品研发: 影响细胞转染效率的因素有哪些？; sj314520: 转染试剂、转染方法、细胞状态、载体构建、细胞培养基、细胞密度、DNA质量√转染试剂瞬时转染和稳定转染可以选择不同的转染试剂，转染试剂的选择又可以根据已经发表的文献，已经有很多细胞株被成功转染，通过文献资料可以参考最适的转染试剂，当然也要根据不同的实验需求选择。一般来说转染试剂的要求是低毒，高效，廉...; 赞同0 反对 0 人感谢 0 评论 1 回复

sj314520 在 2023-10-17 23:32 回答了问题 药品研发: 病毒转染法的优缺点有哪些？; sj314520: √优点高转染效率（对原代细胞有80-90%）;适用于较难转染的细胞系;可用于构建稳定表达或瞬时表达的细胞系。√缺点被转染的细胞系必须含有病毒受体;基因插入大小受限（病毒载体~10kb，非病毒载体~100kb）;技术难度高，且构建重组蛋白很费时。; 赞同0 反对 0 人感谢 0 评论 1 回复

sj314520 在 2023-10-17 23:32 回答了问题 药品研发: 脂质体转染法的优缺点有哪些？; sj314520: √优点操作快速简单；结果可重复；转染效率高；适用于生产瞬时和稳定的蛋白质。√缺点需进行条件优化(一些细胞系对阳离子脂质体较敏感)；有些细胞系不容易转染；培养基中血清的缺失会增加细胞毒性。; 赞同0 反对 0 人感谢 0 评论 1 回复

sj314520 在 2023-10-17 23:31 回答了问题 药品研发: 电转法的优缺点有哪些？; sj314520: √优点原理简单；条件优化后可产生重复性的结果；不限制细胞类型和条件；条件优化后可以快速转染大量细胞。√缺点需要特殊的设备；需要优化电转脉冲和电压参数；对细胞伤害较大；细胞死亡率很高因此需要的细胞量较大。; 赞同0 反对 0 人感谢 0 评论 1 回复

sj314520 在 2023-10-17 23:29 回答了问题 药品研发: 常用的细胞转染的方法有哪些？; sj314520: 电转法、脂质体转染法、磷酸钙法、病毒转染√电转法高脉冲的电压破坏细胞膜，在细胞膜表面形成孔道，DNA通过孔道进入细胞。 √脂质体转染法带正电荷的脂质体靠静电作用和DNA结合形成DNA-脂质体复合物，然后通过细胞的内吞作用进入细胞。√磷酸钙法能够促进外源DNA和细胞的结合，磷酸钙-DNA复合物能...; 赞同0 反对 0 人感谢 0 评论 1 回复

sj314520 在 2023-10-17 23:28 回答了问题 药品研发: CHO-S,CHO-DG44和CHO-K1的优缺点？; sj314520: CHO-K1代谢偏好于抗体形成，CHO-S代谢偏好于生物量形成，CHO-DG44介于之间√文献报道1：CHO-S,和CHO-DG44相比CHO-K1在ActiCHOTMP培养基中表现出了4-6倍的细胞密度和抗体表达量增长，因此在批量培养期间CHO-K1显示出最佳的抗体生产性能，CHO-S最差，细胞存...; 赞同0 反对 0 人感谢 0 评论 1 回复

«
1
2
3
4
5
6
7
8
...
14
15
»

个人成就

获得 1 次赞同

被 36 人关注了

关注了 39 人

技术支持 WeCenter © 2024 粤ICP备2023143277号-1